Tratar a passagem de duas AdMSCs com meios contendo 10 nanogramas por mililitro de TNF alfa por 24 horas ou sem TNF alfa para células não estimuladas. Depois de lavar e incubar as células em meio sem soro por quatro horas, adicione 25.000 AdMSCs a cada inserção e incube por 24 horas a 37 graus Celsius. Aspirar o conteúdo de ambos os poços e inserir, em seguida, lavar duas vezes com PBS deixando um mililitro de PBS em cada poço.
Usando pinças, remova as inserções uma a uma e limpe suavemente, mas completamente, a câmara superior com um cotonete para remover as células não migradas. Aspirar o PBS restante e pipetar 500 microlitros de solução violeta cristalina para o poço e a câmara superior da pastilha. Aspirar a solução de cristal violeta do poço e da câmara superior da pastilha após uma hora de incubação.
Depois de lavar e limpar a câmara superior, coloque a pastilha em uma nova placa de 24 poços contendo um mililitro de PBS. Usando um microscópio invertido com uma câmera, a imagem de quatro áreas aleatórias em direção ao centro da inserção sob uma objetiva de 10 vezes. Carregue as imagens no software de processamento de imagens preferido e ajuste o plano de fundo para melhorar o contraste com as células manchadas de roxo.
CLIA infectados com 22L mostraram expressão aumentada de RNAm para os marcadores inflamatórios CCL2, CCL5 e IL1 beta, e para o marcador astrócito S100 beta em comparação com aqueles tratados com NBH. A cocultura com AdMSCs diminuiu a expressão das citocinas inflamatórias CCL2, CCL5 e IL1 beta, mas não TNF alfa para células infectadas com MBH e 22L. BV2s cocultivadas com AdMSCs mostraram uma diminuição no RNAm para os marcadores inflamatórios IL1 beta, IL-6, TNF alfa e a proteína C1qa do complemento em células tratadas com NBH e RML.
Adicionalmente, as AdMSCs diminuíram o gene M1 da micróglia CD16 e aumentaram o marcador M2 da micróglia ARG-1. O ensaio de migração in vitro sugeriu que as AdMSCs apresentaram migração significativa para meios contendo 1% RML.
