Antes de colocar o mouse anestesiado no inserto de imagem ao vivo instalado no estágio do microscópio invertido, rosqueie o tubo de isoflurano com o cone nasal conectado através do suporte de tubo de canto no inserto. Depois de conectar a placa de calor ao controlador que contém uma sonda de termômetro anal conectada e ligá-la, transfira o mouse anestesiado da câmara de indução para a placa de calor. Em seguida, prenda o cone do nariz no mouse.
Insira a sonda anal no animal e ajuste o controlador para manter uma temperatura corporal estável de cerca de 36 graus Celsius. Cubra o rato corretamente posicionado com um filme plástico aderente para reter o calor do corpo e elevar a temperatura corporal. Posicione o mouse de forma que sua cabeça se alinhe com o disco deslizante da tampa e imobilize sua orelha no centro da tampa de vidro usando um clipe ou fita auricular de metal.
Depois de concluir a imagem, selecione a opção Baixo fluxo no vaporizador eletrônico para interromper a entrega de isoflurano. Transfira o mouse para uma almofada de aquecimento até que ele se torne deambulador. Depois de remover o disco deslizante da tampa, limpe-o com papel de lente e solução de lente.
Guarde-o corretamente para evitar riscos para reutilização. Em seguida, retire a tubulação anestésica do suporte de inserção e desaparafuse a inserção do estágio do microscópio. As pilhas Z adquiridas de tecido auditivo vivo de camundongo fluorescentemente marcado mostraram deriva mínima nos eixos x, y e z ao longo do tempo, validando as inserções personalizadas de imagens ao vivo impressas em 3D.
Os pontos de tempo de um filme de lapso de tempo de três horas das células epidérmicas de orelha de camundongo mCherry positivas de um camundongo macho adulto revelaram um único plano z permanecendo em foco durante o tempo prolongado. Observações semelhantes foram feitas a partir de outro filme de lapso de tempo de três horas de fibroblastos dérmicos de orelha positivos para GFP de uma rata adulta.
