Para iniciar o procedimento dentro da sala de cirurgia devidamente organizada, coloque o porco anestesiado na posição de decúbito esternal e certifique-se de que todas as linhas e tubos conectados estejam fixados. Remova quaisquer pelos residuais da área raspada designada para ferimento usando creme de depilação. Após esterilizar os locais da ferida, marcar a área com um molde de queimadura estéril e um marcador cirúrgico da pele.
Ajuste o queimador ajustando o ponto de ajuste na unidade de controle para 150 graus Celsius. O set point baixo para 145 graus Celsius e o set point alto para 155 graus Celsius. Usando blocos de aço inoxidável aquecidos conectados ao dispositivo de queimadura, crie uma ferida de queimadura de espessura total colocando os blocos na pele por 60 segundos.
Tire uma foto digital de toda a parte de trás do porco, incluindo um cartaz com o ponto de identificação e a data do porco. Em seguida, tire separadamente imagens para cada ferida, juntamente com uma régua e um cartaz exibindo o ID do porco, o ID da ferida e o ponto de tempo. Para avaliar a perfusão microvascular da ferida em tempo real usando laser speckle imaging ou LSI, imagine todas as feridas em um único registro usando um imageador de perfusão sanguínea LASCA.
Para medir a perda de água transepidérmica ou TEWL, coloque uma cobertura de sonda limpa sobre a ponta da sonda TEWL, que estará em contato com o tecido da ferida. Meça cada ferida cinco vezes, primeiro no centro, seguido de cada canto. Em seguida, exporte todas as leituras para uma planilha.
Realizar um mapeamento harmônico de ultrassom ou HUSD escaneando a ferida com uma sonda de ultrassom da linha média ou coluna vertebral, começando pela pele normal e movendo-se em direção ao lado lateral do porco sobre as feridas até que a pele normal seja novamente atingida. Siga o padrão de varredura para cada ferida no modo B e no modo elastografia tecidual. Altere a anotação depois que cada ferida for imageada no modo B e no modo elasto, que são dois registros por ferida.
Uma vez que todas as imagens estejam completas, cubra as feridas da queimadura individualmente com curativos de filme transparente ou o curativo teste. Em seguida, coloque um curativo de filme transparente maior sobre toda a área da ferida. Aplique uma segunda camada de gaze de rolo frouxamente ao redor de todo o tronco do porco para absorver qualquer líquido exsudado das feridas.
Cubra a gaze frouxamente com uma camada de bandagem elástica flexível. Cubra a bandagem elástica com uma camada final de fita elástica de quatro polegadas. Após a interrupção do gás anestésico após a conclusão do curativo, deixe o porco permanecer em oxigênio por pelo menos cinco minutos.
Para inocular as feridas por queimadura no terceiro dia pós-queimadura, disperse o inóculo pela superfície das feridas expostas usando uma pipeta e espalhe-o uniformemente usando um espalhador descartável. Para coletar as biópsias teciduais para análise após exames de imagem, infiltrar-se na área ao redor da ferida com bupivacaína a 0,5%. Usando um bisturi descartável com uma lâmina tamanho 10, corte uma tira de 3-4 milímetros de largura de uma borda da ferida para a outra, mantendo pequenas margens de pele normal em ambos os lados.
Corte uma biópsia por punch de 6 milímetros da ferida ou do leito da ferida ou da borda da ferida. Conseguir hemostasia após a coleta das amostras pressionando suavemente a ferida com uma gaze estéril. Cobrir a ferida com um curativo não aderente e atacá-la como demonstrado anteriormente.
A análise da biópsia pela coloração hematoxilina e Eosina mostrou distorção e necrose de todas as camadas histológicas da pele. O biofilme estabelecido foi validado no sétimo dia após a inoculação por unidade formadora de colônia. Digitalizar a imagem de microscopia eletrônica e coloração de imunofluorescência.
As queimaduras apresentaram membrana biogênica espessa na superfície da ferida até o sétimo dia pós-inoculação, confirmando a infecção e estabelecimento do biofilme. A área da ferida começou a diminuir no dia 14, mas a cicatrização incompleta para cerca de 25% do tamanho original da ferida foi observada no dia 56, indicando cronicidade da ferida. A cronicidade da ferida e a cicatrização prejudicada foram confirmadas pelo TEWL mostrando alta perda de água transepidérmica em todos os momentos medidos.
Isso também foi confirmado pela supressão das proteínas juncionais apertadas, ZO-1 e 2, e pela restauração prejudicada da função de barreira cutânea.
