Após preparar o camundongo para a cirurgia, identifique a área alvo, sete milímetros à esquerda do esterno e cerca de sete milímetros acima do rebordo subcostal. Levante a pele sobre a área identificada usando pinça e faça uma incisão circular de 10 milímetros usando uma tesoura microdissecante afiada para cortar apenas a pele. Em seguida, remova o tecido mole sobre a caixa torácica e cauterize os principais vasos sanguíneos em ambas as extremidades usando uma caneta cauterizada.
Eleve a sexta ou sétima costela com pinça e use uma única lâmina da tesoura microdissecante romba para perfurar o músculo intercostal. Agora gire suavemente a tesoura e faça uma incisão de aproximadamente 10 milímetros no espaço intercostal, evitando o contato com o tecido pulmonar e as costelas. Solte o ar comprimido no pulso ou na mão delicadamente para determinar a força de fluxo adequada e limpe o bocal de detritos.
Em seguida, aplique rajadas curtas de ar na incisão para evitar causar lesão pulmonar. Com a pinça, levante a sexta ou sétima costela e insira o afastador na incisão intercostal com lâminas paralelas à parede torácica. Em seguida, solte a alça cuidadosamente para deixar o afastador aberto e revelar o pulmão gradualmente.
Agora aplique duas a três gotas de PBS estéril aquecido a 37 graus sobre o tecido pulmonar exposto para evitar que ele seque. Sobreponha um pedaço de papel alumínio com um pequeno recorte sobre o mouse, posicionando-o diretamente sobre o tecido pulmonar exposto. Certifique-se de que o recorte mostre apenas o tórax aberto e o tecido próximo para conversão de fotos de pulmão direcionadas.
Em seguida, posicione uma caixa com um recorte sobre o mouse e papel alumínio, garantindo que o recorte esteja alinhado com o pulmão exposto. E coloque a lâmpada de conversão de fotos diretamente acima do recorte na caixa. Em seguida, ative a lâmpada de fotoconversão para iluminar o tecido pulmonar exposto por um período contínuo de seis minutos.
Após a conversão da foto, desative a lâmpada e limpe a caixa da lâmpada e a máscara de papel alumínio longe do mouse. Separe o pulmão da parede torácica descarregando ar no punho e, em seguida, descarregando ar na incisão torácica. Segure firmemente a alça do afastador e aperte-a para fechar as lâminas.
Manobrar cuidadosamente o afastador fechado para fora do espaço intercostal, garantindo que não entre em contato com o tecido pulmonar. Em seguida, use a sutura de seda 5-0 para fechar a incisão intercostal com um padrão de sutura contínua simples, garantindo que a costela em ambos os lados da incisão seja incorporada. Puxe a sutura firmemente para garantir o alinhamento das bordas da ferida, restabelecendo a integridade da parede torácica.
Fixar a sutura dando quatro nós na extremidade. Aparar as caudas da sutura o mais próximo possível do nó e fechar a pele com grampos cirúrgicos. Para remover o excesso de ar da cavidade torácica, insira uma seringa de um mililitro com uma agulha calibre 28 abaixo do processo xifoide.
Recue a seringa para aproximadamente um mililitro. Retire a seringa do rato e descarregue o ar. Imagens de Dendra2 exposto expressando metástases pulmonares antes da exposição à luz azul são mostradas.
A exposição de Dendra2 expressando metástases pulmonares à luz azul mostrou que a exposição de seis minutos produziu o sinal mais brilhante no canal fotoconvertido em amostras ex vivo e in vivo. Células fotoconvertidas e não fotoconvertidas foram identificadas em todos os três tipos de tecidos de camundongos submetidos à cirurgia com exposição à luz azul. Apenas células tumorais não fotoconvertidas foram encontradas nos tecidos de camundongos submetidos à cirurgia sem exposição à luz azul.
