Para começar, centrifugar as células CD34-positivas isoladas e ressuspender o pellet celular em 300 microlitros de meio SFM-34 pré-aquecido que é suplementado com 4 citocinas misturadas, e contar as células usando 10 microlitros da suspensão celular. Após contar e ressuspender as células em um volume final de 150 microlitros de SFM-34 suplementado com citocina, adicione 0,5 microlitros de inibidor de ROCK a ele. Aspirar lentamente a laminina dos cavacos fluídicos colocando a ponta de uma pipeta P200 dentro do reservatório na borda do canal.
Em seguida, adicione a suspensão da célula no canal de forma consistente, garantindo que nenhuma bolha seja formada. Incube o chip durante a noite a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono para ligar as células ao canal completamente. Quando as células endoteliais estiverem totalmente aderidas, aspirar o meio conforme descrito anteriormente.
Adicione 200 microlitros de SFM-34 suplementado com citocinas no chip. Substitua o meio diariamente até que as células atinjam 90 a 100% de confluência.
