Para começar, remova os pelos da área precordial do camundongo anestesiado com creme depilatório e posicione o camundongo com as costas para baixo na plataforma de monitoramento fisiológico. Aplique uma pequena quantidade de gel condutor na folha de cobre na mesa de monitoramento fisiológico. Prenda a pausa do mouse neste gel para facilitar a captura de dados de eletrocardiograma e respiração.
Aplique uma pequena quantidade de gel de transmissão de ultrassom para garantir a qualidade de imagem ideal. Alinhe a plataforma lateralmente em um pequeno ângulo entre a sonda e a plataforma e obtenha uma visão do eixo longo paraesternal do coração. Em seguida, localize a seção cardíaca adequada no modo B.
Ative o Doppler colorido na tela sensível ao toque e mova levemente a sonda para encontrar a posição correta. Agora, mude para o modo Pulse Wave pressionando o botão correspondente. Posicione a linha indicadora amarela na artéria coronária paralela à direção do fluxo e pressione o botão Salvar clipe para documentar os dados da linha de base.
Aumente a concentração de isoflurano para 3% e aguarde 30 segundos. Certifique-se de que a velocidade do fluxo aumente gradualmente com o tempo. Pressione frequentemente o botão Salvar clipe novamente para capturar o fluxo sanguíneo em sua velocidade mais alta.
Depois de concluir a imagem ecocardiográfica, remova cuidadosamente o animal da plataforma. Use as ferramentas da função de velocidade de pico para medir as velocidades diastólicas de pico e avaliar a função sistólica do coração usando as imagens adquiridas. Calcule a taxa de letalidade dividindo a velocidade do pico diastólico do fluxo coronariano no fluxo máximo pela velocidade do pico diastólico do fluxo coronariano no início do estudo.
Realize uma toracotomia no quarto espaço intercostal para expor o coração. Em seguida, ligue a artéria LAD usando uma sutura de seda 5-0. Verifique a isquemia em camundongos por meio da confirmação visual da visualização da descoloração a jusante no miocárdio isquêmico.
Realize uma oclusão da artéria LAD por 30 minutos. Em seguida, solte a ligadura e confirme a reperfusão monitorando a vermelhidão da área do músculo cardíaco descolorido por um a dois minutos. Após a oclusão coronária e reperfusão, feche o tórax em camadas e deixe os camundongos se recuperarem por aproximadamente meia hora.
Meça o CFR novamente em 1, 3, 5, 8, 24 e 48 horas após a reperfusão, conforme demonstrado anteriormente. Antes da cirurgia de isquemia e reperfusão, a linha de base da CFR foi medida e os camundongos apresentaram um valor normal de CFR. No entanto, após a cirurgia, houve uma diminuição notável da RFC após uma hora de reperfusão.
Como o tempo de reperfusão foi prolongado, os valores de RFC permaneceram consistentemente baixos, sugerindo que a hipoperfusão poderia persistir por pelo menos dois dias. Não foram observadas alterações significativas na função cardíaca ventricular esquerda quando o CFR foi significativamente reduzido nos camundongos.
