Duas a três semanas antes da aquisição de imagens, o vítreo do olho de um rato anestesiado é injetado com as partículas virais que carregam o indicador de cálcio codificado geneticamente. Usando fundoscopia e OCT, a estrutura da retina é examinada para reações adversas da injeção do indicador de cálcio. Duas semanas após a injeção, a camada de células ganglionares ou GCL exibiu emissão de fluorescência.
Em seguida, inicia-se a excisão da retina do rato eutanasiado. Pegue os olhos que expressam AAV2-CAG-GCaMP5G e remova todo o tecido ao redor do globo ocular usando pequenas pinças curvas e tesouras finas de mola. Em seguida, pegue um pedaço de papel filtro de três por três centímetros.
Posicione-o sobre a tampa de um prato de 3,5 centímetros e regue o papel de filtro com o meio AIMS. Posicione o globo ocular sobre o papel com o segmento anterior orientado para o operador. Use um par de pinças retas para segurar o globo ocular em um ângulo de aproximadamente 45 graus em relação à superfície do prato.
Use o espaço entre as pinças retas para guiar uma incisão com uma lâmina. Em seguida, mergulhe o globo ocular no meio AIMS. Use pinça reta e tesoura fina para separar os segmentos anterior e posterior do olho.
Retire a lente cuidadosamente usando dois pares de pinças retas e desconecte a retina da esclera. Usando uma tesoura de mola fina, faça uma incisão na esclera em direção ao nervo óptico e corte até que a retina tenha sido separada com sucesso do copo ocular. Transfira a peça excisada da retina para a membrana de montagem usando uma pipeta plástica de ponta cortada.
Em seguida, use um par de pinças retas para montar a retina, garantindo que a camada de células ganglionares esteja orientada para cima. Em seguida, use uma pipeta plástica equipada com uma ponta de pipeta de 100 microlitros para remover o meio, facilitando a aderência da peça de retina à membrana porosa. Em seguida, vire o conjunto para o micro eletrodo array ou MEA, posicionando o GCL em cima dos eletrodos.
Em seguida, encha o banho de amostra com meio AIMS oxigenado.
