Adicionar 10 micromolares de sonda de fluorescência Dcfh-DA às células MCF7 e incubar a 37 graus Celsius por 20 minutos. Após a incubação, remova o excesso de Dcfh-DA lavando as células três vezes com PBS. Em seguida, teste a intensidade da fluorescência usando um microscópio de fluorescência e um comprimento de onda de excitação de 488 nanômetros, e um comprimento de onda de emissão de 525 nanômetros.
Incubar as células MC7 com uma solução de sonda fluorescente Fluo-4 AM de cinco micromolares durante 45 minutos a 37 graus Celsius. Após lavar as células três vezes com PBS, determinar a intensidade da fluorescência usando um microscópio de fluorescência com excitação a 488 nanômetros e emissão a 516 nanômetros. O salidrosídeo aumentou significativamente os sinais de fluorescência de ROS mostrados pela coloração imunofluorescente de Dcfh-DA.
Consistentemente, a intervenção com Salidrosídeo também elevou nitidamente a produção de cálcio, evidenciada pela coloração imunofluorescente de Fluo-4 AM.
