Para começar, prepare 10 vezes o meio de cultura M199 dissolvendo o pó M199 até 10 vezes a concentração em 90 mililitros de água deionizada, seguido da adição de 10 mililitros de FBS. Filtrar a solução através de um filtro de 0,22 mícrons. O meio filtrado pode ser armazenado a quatro graus Celsius por até dois meses.
Para preparar o gel de matriz com células vasculares, use cerca de 2 milhões de células vasculares. Resfriar o tubo estéril de 1,5 mililitro contendo o pellet de célula adequadamente preparado em um banho de gelo. Descongele completamente o gel de matriz em um banho de gelo sem misturá-lo ou vomitá-lo.
Da mesma forma, resfriar o meio de cultura preparado 10 vezes M199 juntamente com o reagente de teste ou droga de interesse a quatro graus Celsius. Em seguida, mantendo uma relação de volume de 8,8 para 1 para 0,2, combinar o gel de matriz pré-resfriado com o meio pré-resfriado 10 vezes M199 contendo 10% de FBS, e o reagente de teste pré-resfriado para produzir a mistura de gel de matriz. Finalmente, ressuspenda as células pré-resfriadas em 400 microlitros da mistura de gel de matriz preparada, misturando suavemente para evitar a formação de bolhas.
Mantenha o tubo contendo as células em gel de matriz sobre gelo até que os camundongos estejam prontos para a injeção de gel de matriz.
