Para marcar os pericitos, adicione o corante fluorescente TO-PRO-3 ao líquido cefalorraquidiano artificial ou ACSF. Agora incube o cérebro de rato recém-fatiado no ACSF carregado de corante por 20 minutos em um ambiente escuro à temperatura ambiente. Em seguida, transfira o filtro de malha de nylon com as fatias cerebrais para uma câmara de enxágue de placa de seis poços.
Deixe as fatias cerebrais descansarem na câmara por 10 minutos. Para marcar os pericitos não vitais, incube os cortes cerebrais marcados com TO-PRO-3 em isolados conjugados B4 a 37 graus Celsius por 30 minutos no escuro. Após a incubação, lave as fatias cerebrais em líquido cefalorraquidiano artificial por 15 minutos.
Em seguida, coloque as fatias cerebrais em ACSF gaseadas com 5% de dióxido de carbono e 95% de oxigênio. Para isso, adicione iodeto de propídio a uma concentração de 37 micromolares a 37 graus Celsius. Para interromper a absorção do corante e minimizar a rotulagem de fundo, enxágue as preparações por 15 minutos em ACSF.
Em condições fisiológicas normais, os pericitos cerebrais não experimentam morte celular. Pericitos viáveis que não foram corados com iodeto de propídio foram detectados. Os modelos de HAS devem permear os pericitos vitais dentro da microvasculatura.
Pericitos não vitais também foram detectados. Os pericitos não vitais marcados com iodeto de propídio permaneceram aderidos a toda a microvasculatura.
