Para começar, incite cuidadosamente a pele do rato sacrificado, começando pela abertura do crânio e estendendo-se em direção à área frontal. Usando tesouras, levante e remova delicadamente o crânio sem danificar as leptomeninges, coletando todo o cérebro. Submergir todo o cérebro no tampão de lavagem e lavá-lo suavemente para remover o sangue da superfície.
Transfira o cérebro para uma placa de Petri estéril sem cortar. Em seguida, sob um microscópio, use pinças de ponta fina para extrair as leptomeninges da superfície do cérebro. Usando microtesouras estéreis, corte o tecido das leptomeninges em fragmentos.
Reparar a mistura de enzimas digestivas usando os componentes fornecidos. Adicione 10 mililitros de mistura aos fragmentos e incube a 37 graus Celsius por 15 minutos. Agite suavemente para separar os fragmentos do fundo do tubo.
Em seguida, adicione 10 mililitros de tampão de parada. Centrifugar a suspensão a 300 g durante cinco minutos a quatro graus Celsius. E usando uma pipeta, remova cuidadosamente o sobrenadante.
Adicione 10 mililitros de PBS frio e filtre quaisquer aglomerados através de um filtro de 70 mícrons em um tubo estéril de 50 mililitros. Placa de 10 a quinta células por centímetro quadrado em um frasco T25 revestido com fibronectina com cinco mililitros de meio de cultura e incubar a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono por 24 horas. Após a incubação, substitua o meio por um meio fresco para eliminar as células não aderidas.
