Para começar, incube ovos de galinha fertilizados em uma incubadora umidificada a 38 graus Celsius. Em seguida, coloque um embrião de galinha estágio 28 a 32 em uma placa de Petri de 60 milímetros cheia de HBSS. Depois de dissecar a pele dorsal do embrião e a cabeça, puxe suavemente os botões dos membros para reposicionar o lado ventral do corpo para baixo.
Agora, ao longo dos dois lados do corpo embrionário, faça uma incisão anterior a posterior. Segure os botões dos membros longitudinalmente com um par de pinças para estabilizar o corpo. Use uma pinça de relojoeiro para descascar cuidadosamente a pele do pescoço até a região da cauda.
Use uma tesoura afiada para remover delicadamente quaisquer tecidos subcutâneos remanescentes ainda presos à pele descascada e alise as bordas da pele. Em seguida, adicione dois mililitros de DMEM suplementado a cada poço de um prato de seis poços. Depois de adicionar antibióticos aos poços, coloque uma inserção de cultura de tecido estéril dentro do poço, garantindo que o meio envolva o exterior da inserção de cultura.
Em seguida, mova a pele para uma espátula enquanto estiver imersa em HBSS para evitar vincos e dobras. Uma vez feito isso, transfira a pele excisada para um prato contendo HBSS. Deslize lentamente a pele da espátula para o acessório de cultura sem dobrar.
Usando uma pipeta de 200 microlitros, remova qualquer excesso de HBSS do inserto. Por fim, incube as culturas de explante da pele a 37 graus Celsius com uma mistura de 5% de dióxido de carbono e 95% de ar. Substitua o meio a cada dois dias.
Os primórdios de penas desenvolveram-se em botões de penas curtos após dois dias em cultivo. e longos botões de penas desenvolvidos após quatro dias em cultura. Os placódios dérmicos estavam mais maduros na linha média do que nas laterais.
