Para começar, incube ovos de galinha fertilizados em uma incubadora umidificada. Em seguida, prepare duas vezes solução salina CMF com tampão EDTA 0,25%. Em seguida, retire a pele dos embriões de galinha em solução HBSS e incube-os em duas vezes a solução CMF-EDTA em gelo por 15 a 20 minutos.
Use uma pinça de relojoeiro para separar cuidadosamente o epitélio e o mesênquima. Em seguida, transfira o epitélio e o mesênquima isolados para um único prato limpo contendo HBSS. Para recombinação, coloque o mesênquima em uma placa de Petri contendo HBSS e, em seguida, coloque o epitélio sobre ela, alinhando-a ao longo do eixo anterior / posterior do mesênquima.
Alternativamente, gire o epitélio em 90 graus a partir do eixo anterior posterior mesenquimal. Em seguida, transfira as peles recombinadas para as inserções de cultura em seis placas de cultura de poço. Remova qualquer excesso de HBSS ao redor da pele recombinada.
Depois de adicionar DMEM contendo 10% de FBS ao poço externo da inserção, pipete uma fina camada de DMEM na câmara de inserção, garantindo que o explante permaneça semi-hidratado. Por fim, coloque os recombinantes da pele em uma incubadora a 37 graus em um ambiente de 5% de dióxido de carbono e 95% de ar. Monitore as alterações fenotípicas nas fases iniciais de desenvolvimento da pele usando fotografia de lapso de tempo, com um microscópio de dissecação montado.
Novos placódios apareceram logo após a recombinação e se desenvolveram em botões de penas curtos dois dias após a recombinação. Botões de penas longas se desenvolveram em quatro dias. Quando o epitélio foi girado em 90 graus, a orientação dos novos botões foi determinada pelo epitélio.
