Para começar, coloque o dispositivo gut-on-a-chip em um forno seco regulado a 60 graus Celsius por 30 minutos para eliminar a umidade. Em seguida, usando um gerador de ozônio UV, exponha o dispositivo ao tratamento UV e ozônio por 60 minutos. Fixe a tubulação de entrada, desvio e saída do microcanal superior usando clipes de aglutinante.
Plante a tubulação de entrada para o microcanal inferior e, em seguida, desconecte a tubulação de saída para o microcanal inferior. Certifique-se de que a tubulação de bypass do microcanal inferior permaneça aberta. Usando uma micropipeta P100, adicione 100 microlitros de uma solução de polietilenimina a 1% através do orifício de saída do microcanal inferior.
Reconecte a tubulação de saída para o microcanal inferior. Fixe o desvio de entrada e o tubo de saída do microcanal inferior, seguido pelo tubo de entrada para o microcanal superior usando clipes de ligante. Agora desconecte a tubulação de saída para o microcanal superior, garantindo que a tubulação de bypass permaneça aberta.
Em seguida, adicione 100 microlitros de uma solução de polietilenimina a 1% através do orifício de saída do microcanal superior. Reconecte a tubulação de saída do microcanal superior e deixe o dispositivo incubar à temperatura ambiente por 10 minutos. Repetir o procedimento com glutaraldeído a 0,1% e, em seguida, com água deionizada para remover qualquer excesso de solução de ativação superficial.
Seque o cavaco durante a noite a 60 graus Celsius em um forno. No dia seguinte, retire o cavaco do forno e deixe esfriar em um armário de biossegurança por 10 minutos. Fixe a tubulação de entrada, desvio e saída do microcanal superior, incluindo a tubulação de entrada do microcanal inferior usando clipes de ligação.
Desconecte a tubulação de saída para o microcanal inferior. Adicionar 20 microlitros de matriz extracelular, ou mistura de MEC, através do orifício de saída do microcanal inferior. Em seguida, reconecte a tubulação de saída para o microcanal inferior.
Fixe a tubulação de entrada, desvio e saída do microcanal inferior, incluindo a tubulação de entrada do microcanal superior com clipes de ligação. Depois de desconectar a tubulação de saída para o microcanal superior, adicione 20 microlitros de mistura de VCM através do orifício de saída do microcanal superior. Reconecte a tubulação de saída do microcanal superior e, em seguida, remova o clipe de ligante da tubulação de saída do canal inferior, garantindo que ambos os tubos de saída estejam abertos.
Coloque o chip em uma incubadora de dióxido de carbono de 37 graus Celsius 5% por uma hora.
