Reviving the Cryopreserved Day 32 hESC-Derived Photoreceptor Progenitors

Comece colocando o PRDM em banho-maria a 37 graus Celsius. Remova um criovial contendo células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC do dia 32 do nitrogênio líquido e mantenha-o no gelo seco. Em seguida, descongele o criovial em banho-maria a 37 graus Celsius por três a cinco minutos.

Ressuspender as células em um mililitro de PRDM. Centrifugar-os a 130G por quatro minutos Após a remoção do sobrenadante, ressuspenda o pellet em um mililitro de PRDM. Para contar as células, pegue 10 microlitros da suspensão celular e misture com 0,2% de azul de tripano, seguindo as instruções do fabricante.

Pipetar a mistura de células para a lâmina da câmara de contagem de células e determinar o número e a viabilidade da célula usando um contador de células automatizado. Se a viabilidade celular for superior a 70%, centrifugar a suspensão celular restante a 130G por quatro minutos. Remover o sobrenadante e ressuspender o pellet de células em PRDM para transplante.

Usando uma ponta de pipeta de 10 microlitros, ressuspenda os aglomerados celulares no tubo de microfuga até que nenhum aglomerado seja visível. Coloque a suspensão em uma seringa de injeção de calibre 33 e confirme a extrusão da solução celular através da agulha.