Para começar, injete um analgésico preemptivo em um camundongo anestesiado. Usando cortadores, raspe a cabeça do mouse. Instale o animal em uma mesa estereotáxica e posicione corretamente as barras auriculares.
Fixe a boca do rato ao pedaço do rato e posicione cuidadosamente a língua para fora para evitar a sufocação. Depois de verificar a profundidade da anestesia, posicione o suporte de elevação abaixo do animal para garantir que o corpo e a cabeça permaneçam nivelados horizontalmente. E use uma almofada quente com papel para manter a temperatura do animal.
Aplique pomada em ambos os olhos para evitar o ressecamento. Em seguida, usando iodo e álcool, desinfete a cabeça do rato. Use um bisturi para fazer uma incisão ao longo da linha média da cabeça com o corte se estendendo por trás dos olhos para postar a sutura lambda.
Expor o crânio e esfregá-lo com uma ponta de algodão estéril saturada em solução de cloreto de sódio 0,9. Sob um estereomicroscópio, identifique a veia rhinal rostral ou RRV e use um lápis estéril para marcá-la. Usando uma agulha estéril como referência, confirme a orientação do cérebro.
Certifique-se de que não haja alterações nas coordenadas DV e ML. Em seguida, posicione uma pipeta de vidro estéril contendo a solução viral na referência RRV para referência anteroposterior zero. Avançar a pipeta ao longo da sutura sagital até atingir a coordenada anteroposterior escolhida.
Marque este ponto com um lápis estéril e levante a agulha. Perfure cuidadosamente um pequeno círculo ao redor da posição marcada para evitar a quebra do seio sagital superior e remova o pedaço do crânio com uma pequena pinça. Em seguida, utilizando a mediana do seio sagital superior como referência médio-lateral, mova a pipeta para a posição e abaixe até tocar a dura-máter como referência dorsoventral.
Crie uma ligeira quebra na dura-máter e abaixe a pipeta para a posição dorsoventral preferida. Injete a quantidade especificada de vírus adenoassociado ou vetores AAV no cérebro e remova a pipeta. Liberte o rato das barras auriculares e, em seguida, feche a pele com clipes cirúrgicos.
Faça a transição do animal para uma gaiola aquecida separada para se recuperar. Fique de olho na recuperação do mouse. Uma vez que ele recupere a consciência, devolva-o ao seu recinto original quando estiver totalmente recuperado.
