Culture of bEnd.3 Cells and Cell Viability After CoCl2 Treatment

Para começar, prepare o meio de cultura de células DMEM contendo FBS, penicilina e estreptomicina. Além disso, prepare uma solução estoque de cloreto de cobalto de 100 milimolares adicionando 1,30 miligramas de cloreto de cobalto a 100 microlitros de DMSO. Em seguida, semeie um mililitro de células BEND3 em uma placa de cultura de 100 mililitros contendo meio DMEM e cultive a 37 graus Celsius em uma atmosfera umidificada de dióxido de carbono a 5%.

Troque o meio a cada dois ou três dias e subculte as células duas vezes por semana. Após as células BEND3 crescerem até 80% de confluência, digerir as células com 0,25% de tripsina por 30 segundos. Conte as células usando um contador de células e faça uma suspensão de densidade sete vezes 10 para a quarta célula por mililitro.

Em seguida, semeie 100 microlitros dessa suspensão celular em uma placa de 96 poços para adesão celular. Em seguida, lave as células com PBS e adicione 100 microlitros de meio de cultura contendo cloreto de cobalto. Cultivar as células por 24 horas.

Após a incubação, retire o meio e lave com PBS. Em seguida, adicione 100 microlitros da solução CCK-8. Incube as placas a 37 graus Celsius por uma hora e, em seguida, meça a absorbância a 450 nanômetros usando um leitor de microplacas.

Calcular a viabilidade celular induzida pelo cloreto de cobalto de acordo com esta fórmula. Selecionar a concentração com diferença significativa na redução da viabilidade celular em relação ao grupo controle. A viabilidade de células BEND3 tratadas com diferentes concentrações de cloreto de cobalto foi analisada por CoCl2.

Os resultados indicaram que 300 micromolares de cloreto de cobalto apresentaram significativa citotoxicidade in vitro.