Para começar, distribua aleatoriamente os camundongos cuja cavidade oral é negativa para o crescimento de cândida em nove grupos, cada um correspondendo a uma concentração diferente de curcuminoides com ou sem luz. No primeiro dia, injetar por via subcutânea a droga imunossupressora prednisolona em todos os membros dos grupos. Fornecer cloridrato de tetraciclina na concentração de 0,83 miligramas por mililitro em água potável desde o primeiro dia até o final do experimento.
No segundo dia, administrar clorpromazina por via intramuscular em cada músculo da coxa para sedar o camundongo para inoculação intraoral. Em seguida, mergulhe um cotonete estéril em uma suspensão padronizada e recém-preparada de candida albicans. Depois de colocar o rato em decúbito dorsal, esfregue a língua com uma zaragatoa embebida durante 30 segundos.
No quinto dia, administrar uma injeção subcutânea complementar de prednisolona para manter a imunossupressão. No sétimo dia, antes do tratamento, colocar o camundongo anestesiado em decúbito dorsal sobre um dispositivo de DAP equipado com fios. Enrole o fio ao redor dos incisivos para manter a boca aberta.
Distribuir 70 microlitros do fotossensibilizador no dorso da língua de cada camundongo pertencente aos grupos C+L+. Em seguida, mova a língua de volta para dentro da cavidade oral e mantenha o camundongo em um ambiente escuro por 20 minutos como um período de pré-irradiação. Após o período de fotossensibilização, colocar o aparelho de LED no dorso da língua e iluminá-lo por sete minutos.
Aplicar fotossensibilizador nos grupos C+L conforme demonstrado e manter os camundongos no escuro por 27 minutos. Imediatamente após o tratamento, esfregue o dorso da língua por um minuto, usando um cotonete estéril para recuperar candida albicans da língua. Coloque cada swab de amostra em um tubo contendo um mililitro de soro fisiológico estéril e vórtice por um minuto para ressuspender as células microbianas.
Sem demora, realize diluições seriadas de dez vezes em PBS e alíquota de placa de 25 microlitros em placas de ágar Sabouraud Dextrose em duplicata. incubar as placas aerobicamente a 37 graus Celsius por 48 horas. Após 48 horas, use um contador de colônia digital para determinar as contagens de colônias de leveduras.
Calcular a carga de candida albicans para cada animal. No oitavo dia, após a eutanásia adequada do animal, proceder à remoção cirúrgica da língua, realizar a remoção da língua antes das papilas circunvaladas para garantir que toda a língua seja removida. Por fim, proceder à análise histopatológica da língua isolada.
O modelo murino de candidíase oral mostrou manchas brancas típicas e pseudomembranas na língua de camundongos infectados. A terapia fotodinâmica antimicrobiana reduziu a viabilidade de candida albicans na concentração de 80 curcuminóides micromolares. As línguas dos animais não infectados apresentaram tecidos normais e saudáveis, incluindo: lâmina própria intacta, membrana basal e papilas filiformes.
No grupo C-L, leveduras e filamentos foram observados na camada epitelial queratinizada. Uma resposta inflamatória leve estava presente no tecido conjuntivo subjacente. Em contraste, camundongos tratados com terapia fotodinâmica antimicrobiana mediada por 80 curcuminóides micromolares apresentaram menos células fúngicas na camada queratinizada do epitélio lingual.
