Comece coletando a cultura de BCG na fase de crescimento torarítmico médio ou tardio. Centrifugar tinha 3000 G por 10 minutos, depois descartar o sobrenadante. Em seguida, adicione 10 mililitros de PBS para lavar as bactérias.
Após a centrifugação, descarte o sobrenadante. Ressuspender o pellet em cinco mililitros de meio de infecção. Coloque o tubo em banho de ultrassom por 15 minutos na potência máxima com frequência de 80 hertz.
Agora centrifugar a 1.000 G por 10 minutos. Recolher o sobrenadante e descartar o pellet. Medir a densidade óptica do sobrenadante.