Para realizar a diluição seriada usando uma placa de poço, primeiro coloque suspensões de Mycobacterium nas linhas A e E de uma placa de 96 poços. Adicionar 180 microlitros de água deionizada nos poços restantes para o processo de diluição em série. Utilizando uma pipeta de 12 canais, ressuspenda as suspensões na linha A e transfira 20 microlitros para a linha B.Repita a transferência de suspensão para as fileiras B e C até que a última diluição seja atingida na linha D.Para micro plaqueamento de gotículas, use uma pipeta multicanal de 0,5 a 10 microlitros com pontas finas para transferir cinco microlitros de cada fileira da placa de 96 poços para a placa quadrada média sólida.
Permita que as gotículas toquem levemente o ágar, garantindo a transferência adequada e minimizando a retenção de líquido dentro da ponteira. Deixe as gotículas secarem e feche a placa de ágar. Incubá-lo a 37 graus Celsius enquanto monitora o crescimento bacteriano.
Opcionalmente, coloque as placas de ágar em um saco plástico selado para evitar a secagem. Após seis a 10 dias de incubação, verifique se há colônias individuais visíveis a olho nu. Coloque a placa sob um microscópio invertido usando a objetiva de menor aumento.
Como alternativa, use uma câmera para tirar uma foto da gota e conte manualmente as colônias no computador usando o ImageJ para contagem automatizada de colônias. A unidade formadora de microcolônias ou ensaio de micro-UFC foi usado para produzir grandes quantidades de dados a partir de uma pequena quantidade de placas de ágar. O uso de lipossomas para liberação de saquinavir aumentou a eficácia do tratamento contra cepas de microbactérias com diferentes resistências a drogas.
