Comece coletando espermatozoides do epidídimo da cota, isolados de um camundongo modelo transgênico expressando AcroSensE. Realizar a coleta de espermatozoides em uma placa de cultura de tecidos de 3,5 centímetros contendo 0,5 mililitros de meio MW, permitindo um procedimento de nado de 15 minutos a 37 graus Celsius. Em seguida, usando pinças finas, remova cuidadosamente qualquer tecido epididimal da placa de coleta de natação.
Transfira o meio que contém os espermatozoides para um tubo cônico de 15 mililitros e, usando um rotor de balde oscilante, centrifugar a suspensão a 100 G por um minuto à temperatura ambiente. Com a ajuda de uma pipeta de plástico, colete o sobrenadante MW contendo os espermatozoides enquanto descarta qualquer pelota de detritos de tecido grosseiro e transfira-o para um tubo de fundo redondo. Ajuste o volume sobrenadante para um mililitro adicionando 500 microlitros de MW médio pré-aquecido a 37 graus Celsius.
Centrifugar esta mistura a 400 G durante oito minutos à temperatura ambiente num tubo de fundo redondo. Em seguida, remova cuidadosamente o sobrenadante, deixando para trás os espermatozoides soltos. Usando um tubo de transferência de furo grande, ressuspenda o esperma batendo suavemente o tubo manualmente conhecido como movimento do dedo.
Uma vez que os espermatozoides são uniformemente ressuspensos, transferi-los para um novo tubo de fundo redondo.
