Comece revestindo as placas de 35 milímetros com Poly-D-Lysine, ou PDL. Para isso, dispense uma gota de 0,5 microlitro de PDL no centro de uma placa de cobertura. Usando uma pipeta graduada de 10 microlitros, esfregue a gota PDL através da lamínula.
Deixe a placa de cobertura revestida secar a 37 graus Celsius por 10 minutos. Para obter imagens dos espermatozoides recém-coletados de um modelo de camundongo expressando AcroSensE, adicione 80 microlitros da suspensão de espermatozoides preparada ao centro da placa de cobertura revestida com PDL. Em seguida, adicione lentamente três mililitros de mídia base de Whitten pré-aquecida a 37 graus Celsius ao prato.
Prossiga para realizar a imagem usando uma combinação de um microscópio com a configuração de entrega de estimulante de célula única. Primeiro, monte o prato contendo os espermatozoides no microscópio. Em seguida, usando o micromanipulador, posicione a ponta capilar do sistema de liberação de estimulantes cerca de 100 mícrons para o lado e cinco a 10 mícrons acima do plano da célula de interesse.
Posicione o capilar dentro de 100 mícrons da cabeça do esperma. Em seguida, inicie a sequência de imagens no microscópio. Imagem de espermatozoides a uma alta taxa de quadros, de preferência maior que 10 quadros por segundo.
10 segundos após iniciar a aquisição da imagem, ative o sistema de liberação de célula única para fornecer um sopro de estimulante de 10 segundos. Continue capturando imagens de células por uma duração de 10 a 15 minutos. Da mesma forma, imagine várias células de um único prato de acordo com os locais mostrados na tela.
