Para começar, remova a placa de cultura Transwell contendo a monocamada enteróide ileal bovina 2D da incubadora. Deixe a placa se equilibrar à temperatura ambiente no armário de biossegurança por alguns minutos. Verifique se os eletrodos STX2 foram pré-condicionados e se o voltômetro ohm foi calibrado para 1000 ohms, de acordo com as instruções do fabricante.
Inserir a extremidade mais longa da sonda no compartimento basolateral e a extremidade mais curta no compartimento apical da cultura de células epiteliais Transwell. Com o setup estabilizado, faça três medições de resistência elétrica transepitelial por inserção Transwell, incluindo a inserção desprovida de células. Calcule a média das medidas para cada inserção respectiva.
Subtrair a medida média dos poços em branco do experimental, bem depois multiplicá-la pela área de superfície da inserção para determinar a resistência da barreira epitelial. Monocamadas 2D confluentes foram observadas em menos de uma semana de cultivo. As medições TEER mostraram um aumento constante nos valores ao longo de sete dias antes de declinar no dia 12.
A microscopia confocal da monocamada 2D corada demonstra a localização da coloração nuclear DAPI, E-caderina e F-actina. As células parecem ser diferenciadas com células enteroendócrinas, paneth e linhagens de células enterocitárias. A estimulação apical da monocamada resultou em aumento da produção de citocinas.
