Para começar, amarre o camundongo anestesiado em decúbito dorsal no sistema de imagem com o focinho em um cone nasal. Posicione o mouse de forma que as pernas estejam estendidas e os joelhos levemente apontados para o ar. Abra o software compatível no computador do sistema de geração de imagens.
No painel de controle de aquisição, clique em inicializar para aquecer o sistema e aguarde até que a luz de temperatura fique verde. Em seguida, clique em Imaging Wizard. Depois de clicar no par de filtros, verifique se a configuração está configurada para epi-iluminação.
Em seguida, pressione Avançar. Na lista suspensa, encontre a sonda de interesse para selecionar as configurações corretas de excitação e emissão e clique em Avançar. Escolha o mouse para o assunto da imagem.
Nos parâmetros de exposição, verifique se as configurações automáticas estão marcadas e se as opções de fluorescência e fotografia estão selecionadas. Na lista de verificação do campo de visão, selecione D até 22,6 centímetros e pressione Avançar. Depois de confirmar que todas as configurações estão corretas, pressione o botão de sequência de aquisição e confirme se a imagem recebeu exposição adequada.
Para analisar a imagem, coloque um círculo de interesse de tamanho consistente sobre cada articulação do joelho sobre a imagem em preto e branco. Calcule a eficiência radiante total e a eficiência radiante média para cada articulação do joelho. Se a eficiência radiante também for calculada nas pernas contralaterais, normalize os dados dividindo a medida da eficiência radiante da perna lesada pela da perna contralateral.
A imagem de reflectância por fluorescência mostrou atividade de protease significativamente maior nas articulações lesadas de camundongos em comparação com os camundongos não lesados. As articulações lesadas apresentaram eficiência radiante média 43% maior em comparação com as articulações contralaterais e as articulações de camundongos não lesados. Uma eficiência radiante 30 a 80% maior foi observada nas articulações lesadas, em comparação com as contralaterais duas semanas após a lesão.
Em contraste, as articulações operadas cirurgicamente exibiram 300% mais eficiência radiante na quarta semana em comparação com as articulações contralaterais, sugerindo um notável efeito de confusão da cirurgia.
