Para começar, pesar três gramas de Rhodiola crenulata pó e transferi-lo para um frasco cônico de 100 mililitros. Usando uma pipeta de tigela grande, adicione 25 mililitros de metanol na garrafa. Coloque o frasco no instrumento ultra-sônico.
Ajuste a potência para 250 watts, frequência para 40 kilohertz, tempo para 30 minutos e inicie a ultrassonografia. Em seguida, enxágue a parte externa da garrafa em água corrente até atingir a temperatura ambiente. Filtrar a solução através de uma membrana microporosa de 0,22 mícrons.
Usando uma seringa de um mililitro, aspirar 800 microlitros de líquido do frasco e coletar 400 microlitros da solução midstream em um frasco de amostra cromatográfica. Medir e adicionar um miligrama de salidrósido, 0,5 miligramas de tirosol e 0,5 miligramas de ácido gálico em três balões volumétricos separados de um mililitro. Em seguida, encha cada frasco até a balança marcada com metanol.
Sonicate as amostras no instrumento ultra-sônico usando as condições descritas anteriormente. Após ultrassom, aspirar 800 microlitros de líquido do frasco. Filtrar a solução através de uma membrana microporosa de 0,22 micrómetros e recolher 400 microlitros de filtrado no frasco.
Adicione triclorometano, acetato de etila, metanol e ácido fórmico em um lado do cilindro de cromatografia de tanque duplo. Agite o cilindro para misturar o conteúdo uniformemente e cubra o cabeçote superior. Disponha as soluções padrão de ácido gálico, salidrósido, tirosol e nossa solução de crenulata no rack de amostras nas posições A1 a A4. Coloque uma folha de silicone de 5x10 centímetros na mesa de amostragem.
Ligue a máquina de amostragem automática e abra a válvula de controle de ar. Pressione o botão Continuar para obter uma amostragem automática. Após a amostragem, desligue a máquina e a válvula de ar.
Retire a folha de silicone da máquina. Coloque a folha de silicone no outro lado do cilindro de cromatografia de tanque duplo. Tampe o cabeçote superior e pré-saturar por 20 minutos.
Em seguida, use uma pinça para segurar a extremidade superior da placa de camada fina e coloque rapidamente a folha de silicone no agente de revelação. Uma vez que o solvente orgânico evapora, pulverize a folha de silicone com solução cromogênica. A análise cromatográfica em camada delgada mostrou que a amostra de R. crenulata apareceu em manchas da mesma cor, correspondendo aos padrões de ácido gálico, salidrósido e tirosol.
