Comece injetando células de glioma C6 nas áreas superficiais do cérebro de camundongos para criar um modelo de glioblastoma em camundongos. Em seguida, fixe uma barra de cabeça na janela craniana e permita que os ratos se recuperem. Depois, injete nanopartículas fluorescentes marcadas por via intravenosa no camundongo para realizar imagens de dois fótons no cérebro.
Ligue imediatamente o laser Ti:safira e o interruptor principal do sistema. Em seguida, inicie o software de visualização da pradaria. Agora imobilize o mouse sob o microscópio de dois fótons em um palco personalizado.
Coloque o animal em decúbito ventral sobre uma almofada aquecida e prenda-o com a fita adesiva sem contrair o tórax. Adicione uma gota de água à janela craniana e ajuste o foco. Para monitorar a frequência cardíaca e a oxigenação sanguínea do animal, posicione o sensor na pata traseira.
Ajuste a posição da cabeça. Usando o filtro RFP, localize o campo de imagem desejado. Uma vez que a orientação da amostra e o campo de visão são determinados, mude o microscópio do modo de campo largo para o modo de microscopia de varredura de luz.
Certifique-se de que o laser Ti:safira está bloqueado em 920 nanômetros e abra todas as persianas. Ajuste as tensões PMT para 500 a 600 volts. Pressione a imagem ao vivo no software para iniciar a geração de imagens.
Depois de obter uma imagem clara, use o software e o estágio motorizado para definir a parte superior e inferior de uma pilha de imagens no software. Aumente lentamente os pockels ou o ganho de PMT para compensar a escuridão em profundidades crescentes. Defina um caminho de salvamento e inicie a série Z.
Quando a pilha estiver concluída, use a reprodução para revisar a qualidade da pilha. Uma vez terminada a imagem, mova o animal para uma gaiola de recuperação. Saia da vista Prairie, certifique-se de que todos os dados são guardados e transferidos e, em seguida, desligue o computador e todo o hardware.
Um número limitado de partículas sofreu extravasamento e é visível nas proximidades das células tumorais 10 minutos após a administração das nanopartículas. No entanto, 24 horas após a administração das nanopartículas, uma abundância de partículas é visível no glioblastoma, sugerindo extravasamento.
