Para começar, ligue o puxador de agulha de vidro e, em seguida, ajuste o calor para 280, a velocidade para 170, o atraso para 250 e o poste para 30. Biselar a ponta da agulha de vidro capilar. Em seguida, usando uma micro bomba de injeção, carregue aproximadamente dois microlitros de solução de RNA de fita dupla de homologia de cadeia pesada de ferritina na agulha de injeção.
Transfira a placa de ágar contendo pupas de Trichogramma dendrolimi para o estágio do microscópio composto. Insira cuidadosamente a agulha de injeção no abdômen de uma pupa em um ângulo de aproximadamente 30 graus e injete gradualmente cinco nanolitros de solução de RNA de fita dupla de homologia de cadeia pesada de ferritina. Incubar aproximadamente 700 pupas por tratamento a 25 graus Celsius por 24 ou 48 horas.
Extrair conteúdo de RNA de 100 pupas por replicação. A partir de aproximadamente 50 pupas por tratamento, observar a emergência das vespas. Finalmente, registre a taxa de emergência de vespas e a taxa de deformidade.
Pupas de T. dendrolimi injetadas com homologia de cadeia pesada de ferritina de fita dupla exibiram uma taxa de emergência significativamente menor em comparação com aquelas injetadas com GFP de fita dupla ou sem injeção. Em vespas emergidas, 51,85% das vespas T. dendrolimi submetidas à homologia de cadeia pesada de ferritina de fita dupla desenvolveram pequenas asas deformadas. Essa deformação estava ausente em vespas injetadas com GFP de fita dupla ou naquelas sem qualquer injeção.
Adicionalmente, pupas de T. dendrolimi injetadas com homologia de cadeia pesada de ferritina de fita dupla mostraram melanismo, indicativo de metabolismo anormal do ferro. A melanina não foi observada em vespas injetadas com GFP de fita dupla ou naquelas sem qualquer injeção.
