Análise de Imagens no Software Gen5 para Analisar a Resposta a Fármacos em Organoides Derivados de Pacientes Usando Imagem Multiplexada de Células Vivas

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02:40 min

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January 5th, 2024

DOI :

10.3791/201046-v

January 5th, 2024

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Kaitriana E. Colling*¹^,², Emily L. Symons*¹, Lorenzo Buroni*³, Hiruni K. Sumanasiri¹, Jessica Andrew-Udoh¹, Emily Witt¹^,⁴, Haley A. Losh¹, Abigail M. Morrison¹, Kimberly K. Leslie⁵, Christopher J. Dunnill⁶, Johann S. de Bono³, Kristina W. Thiel¹^,⁷

¹Department of Obstetrics and Gynecology, Carver College of Medicine, University of Iowa, ²Cancer Biology Graduate Program, Carver College of Medicine, University of Iowa, ³The Institute of Cancer Research: and the Royal Marsden NHS Foundation Trust, ⁴Department of Radiation Oncology, Carver College of Medicine, University of Iowa, ⁵Division of Molecular Medicine, Departments of Internal Medicine and Obstetrics and Gynecology, University of New Mexico Comprehensive Cancer Center, University of New Mexico Health Sciences Center, ⁶Agilent Technologies, ⁷Holden Comprehensive Cancer Center, University of Iowa

* Estes autores contribuíram igualmente

Transcrição

Para começar, obtenha imagens das DOPs fluorescentemente marcadas usando o sistema de imagem de células vivas Cytation 5. Em seguida, inicie o software Gen5. Navegue até Experimentos e clique em Abrir no Gerenciador de Tarefas.

Abra o experimento desejado e selecione Placa, seguido de Exibir na barra de ferramentas. Em seguida, alterne o menu suspenso de dados para Projeção Z. Clique duas vezes em um poço escolhido.

Selecione Analisar. Clique em , desejo configurar uma nova etapa de redução de dados de análise de imagem e clique em OK.In Configurações de análise, defina tipo como Análise celular e canal de detecção como Projeção Z transformada TSF Brightfield. Clique em Opções para abrir a máscara primária e a página de contagem.

Marque Automático na caixa de limite e clique em OK para fechar a janela pop-up. Em Seleção de Objetos, defina tamanhos mínimo e máximo de objetos para filtrar detritos celulares ou células individuais e selecione outros recursos conforme desejado. Em seguida, clique em Aplicar e os objetos mascarados serão realçados.

Para configurar uma análise de subpopulação na barra de ferramentas de análise celular, clique em Métricas Calculadas. Em seguida, clique em Selecionar ou criar métricas de interesse no nível de objeto no canto inferior direito. Nas métricas de objeto disponíveis, escolha as métricas desejadas, como Circularidade, e clique em Inserir.

Clique em OK para confirmar. Em seguida, selecione Análise de Subpopulação na barra de ferramentas de análise celular e clique em Adicionar para criar uma nova subpopulação. Insira um nome para a subpopulação.

Nas métricas de objeto, clique em Adicionar condição para adicionar uma métrica escolhida. Insira os parâmetros desejados na janela Editar condição e clique em OK. Selecione os resultados desejados na tabela na parte inferior da janela e clique em OK, seguido de Aplicar. Em Detalhes do Objeto, selecione a subpopulação designada para exibir o mascaramento.

Se estiver satisfeito, clique em OK na janela Análise Celular e clique em Adicionar Etapa para aplicar a análise a todos os poços.

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