Análise de Imagens de Campo Claro e Fluorescência das Seções Cerebrais de Camundongos para Epon Microscopia Correlativa de Luz e Eletrônica Pós-Incorporação

Para começar, capture as imagens Brightfield e Fluorescent do tecido cerebral de camundongos expressando mScarlet. Localize os dados brutos para criar um mapa de navegação de várias imagens Brightfield de diferentes campos de visão no ImageJ. Em seguida, abra o ImageJ, navegue pelos plugins, clique em costura e selecione costura de grade ou coleção.

Clique em digitar cobra de grade por coluna, selecione ordenar para cima e para a esquerda e clique em definir tamanho da fatia. Navegue até selecionar o caminho dos dados e clique em definir nome do arquivo, seguido de verificar a fusão de exibição. Para importar imagens Brightfield sequenciais de uma célula específica, clique em arquivo e selecione importar, seguido de sequência de imagens.

Para a projeção de intensidade de soma dessas imagens, vá para imagem, selecione pilhas, clique em projeção Z e, em seguida, clique em fatias de soma. Em seguida, selecione editar e clique em inverter para inverter a imagem de projeção de intensidade de soma e melhorar a visibilidade das nanopartículas de ouro. Em seguida, importe imagens de fluorescência sequenciais.

Para criar uma imagem de projeção de intensidade de soma, clique na imagem e selecione pilhas. Em seguida, vá para projeção Z, clique em somar fatias e salve as imagens no formato TIF. Abra as imagens de projeção de intensidade de soma das imagens de Campo Brilhante e Fluorescência.

Vá para a imagem, selecione a cor e clique em mesclar canais para mesclar a projeção de intensidade de soma da imagem de campo brilhante com a imagem de fluorescência. Depois, selecione a imagem e clique no tipo, seguido de cor RGB para converter o formato da imagem composta em RGB. As nanopartículas de ouro aparecerão verdes, e a proteína fluorescente aparecerá vermelha.

Em seguida, salve a imagem como um arquivo TIF.