Registro da Imagem de Microscopia de Fluorescência com a Imagem de Microscopia Eletrônica para Microscopia Correlativa de Luz e Eletrônica

Para começar, abra o software de registro e procure por EasyCLIMv0. Uma vez encontrado, clique em EasyCLIMv0, clique em Imagem ou Sequência e selecione Abrir para importar a imagem de microscopia eletrônica e imagens compostas de imagens de campo brilhante e fluorescentes. Na interface EasyCLIMv0, clique em 2D XYT para selecionar o 2D ou 3D não rígido como modo de alinhamento.

Na janela EasyCLIMv0, clique na caixa suspensa à direita da imagem selecionada que será transformada e redimensionada, provavelmente FM, para escolher tiff de cor RGB composta, em seguida, clique na caixa suspensa à direita da imagem selecionada que não será modificada, provavelmente EM, para escolher seis tiff de imagem. Clique em Iniciar para iniciar o processo de registro. Na janela de imagem de microscopia eletrônica seis imagens tiff, clique em uma nanopartícula de ouro para colocar 0,1 sobre ela.

Na janela de imagem de microscopia de fluorescência, cor RGB composta tiff. Clique na nanopartícula de ouro correspondente para colocar 0,1 nela. Em seguida, clique em Update Transformation para confirmar o alinhamento dos sinais de fluorescência e microscopia eletrônica das nanopartículas de ouro e complete o registro clicando em Parar.

Para exportar a pilha de imagens alinhadas contendo imagens de quatro canais, clique na imagem sobreposta, selecione Imagem ou Sequência e clique em Salvar como.Agora abra o ImageJ, clique em Arquivo e selecione Abrir para importar a imagem de sobreposição. Vá para Imagem, clique em Pilhas e, em seguida, empilhe duas imagens para separá-la em imagens de quatro canais. Depois, selecione Imagem e clique em Cor, seguido de Mesclar Canais para mesclar os três canais em uma imagem composta.

Para converter a imagem composta em uma imagem correlativa de microscopia de luz e eletrônica, selecione Imagem, selecione Tipo e clique em Cor RGB.