Para começar, coloque as larvas de Drosophila em uma placa de Petri vazia de 35 milímetros e use pinças para lavá-las duas vezes com água da torneira para remover qualquer alimento restante. Coloque 10 larvas em uma placa de dissecção contendo PBS gelado. Posicione o lado dorsal da larva para cima e fixe cada extremidade no prato.
Faça uma pequena incisão na parede do corpo da extremidade posterior. Com tesoura de microdissecção, corte a parede do corpo ao longo da linha média dorsal em direção à extremidade anterior. Lave o interior da larva três vezes com PBS usando uma pipeta de Pasteur para expor o cérebro.
Localize e levante o cérebro usando fórceps e isole o cérebro com uma tesoura de microdissecção. Transfira os cérebros dissecados para um tubo de microcentrífuga cheio de PBS gelado e colete todos os cérebros no gelo. Realizar extração de RNA usando um kit de micropreparação de RNA.
Para o isolamento celular S2 Schneider, adicione cinco mililitros de PBS gelado à cultura de células Schneider. Transfira as células para um tubo de 15 mililitros e, em seguida, centrifugue a 1000 G por cinco minutos a quatro graus Celsius para peletizar as células. Usando uma pipeta, lave as células duas vezes com PBS gelado e centrífuga novamente.
Realize a extração de RNA usando um kit de miniprep de RNA.
