Para começar, remova o PBS dos cérebros dissecados de Drosophila por breve centrifugação. Em seguida, adicione 600 microlitros de tampão de lise de RNA à amostra e homogeneize 10 vezes com um pilão plástico. Inspecione o tubo sob um microscópio estéreo para obter lise completa.
Centrifugar a 1000 G durante 5 minutos a 4 graus Celsius para remover detritos teciduais. Transfira o sobrenadante liberado para um novo tubo de microcentrífuga. Isole o RNA usando um kit de preparação de RNA micro seguindo as instruções do fabricante.
Para células S2, remova o PBS e isole o RNA. Determine a pureza e a quantidade do RNA medindo a razão de densidade óptica em 260 e 280 nanômetros. Para preparar a amostra para eletroforese, dilua a amostra de RNA para 40 nanogramas por microlitro e adicione o corante de carregamento de RNA.
Aqueça as amostras a 70 graus Celsius por 5 minutos. Em um gel de agarose, carregue a escada de RNA e as amostras. Realizar eletroforese em tampão MOPS a 100 volts por 60 minutos e visualizar o gel em um transiluminador UV.
A visualização de RNAs isolados de cérebros de larvas de Drosophila por eletroforese de agarose mostrou uma única banda de RNA em torno de 600 nucleotídeos, indicando preparação de RNA intacta.