Para preparar uma placa de gelatina revestida com 24 poços, adicione 200 microlitros da solução de gelatina a 0,2% em cada poço. Agite suavemente a placa para espalhar uniformemente a solução e deixe os poços revestirem à temperatura ambiente. Após 15 minutos, usando um aspirador a vácuo, remova cuidadosamente qualquer sobra de gelatina dos poços.
Adicione 0,5 mililitros de mídia NBIL recém-preparada a cada poço. E coloque a placa em uma incubadora de cultura de tecidos para pré-aquecer. Alíquota 30 mililitros de meio de lavagem em um tubo cônico de 50 mililitros.
Aspirar o meio da placa de cultura de tecidos de mESCs e adicionar a quantidade necessária de meio de descolamento celular. Depois de três a cinco minutos, pipetar para cima e para baixo 15 a 20 vezes usando uma pipeta P1, 000. Observe as células ao microscópio.
Para garantir uma suspensão de célula única, transfira a suspensão de célula para um tubo de 50 mililitros contendo meio de lavagem. Centrifugar a suspensão a 300G durante cinco minutos à temperatura ambiente e aspirar o meio de lavagem. Ressuspenda o pellet em aproximadamente 300 microlitros de meio de lavagem.
