Para começar, aliquote 200 microlitros de mídia NBIL em tubos de 1,5 mililitros. Adicione 26 microlitros da mistura ótima de reagente de transfecção à mistura ótima de DNA. Canalizar os reagentes vigorosamente aproximadamente 10 vezes.
Transfira o volume necessário de suspensões mPSC para os 200 microlitros de tubos NBIL. Em seguida, adicione lipofectamina 2000 e mistura de DNA aos tubos e misture bem por pipetagem. Após cinco minutos, centrifugar a mistura a 300 G por cinco minutos e retirar o sobrenadante, deixando aproximadamente 50 microlitros no tubo.
Ressuspender o pellet em 100 microlitros de meio NBIL. Transfira a suspensão celular para uma placa de 24 poços revestida com gelatina e coloque a placa na incubadora. Transfira o volume necessário de suspensão de mPSC para a semente de 25.000 células por poço de uma placa de 24 poços revestida com gelatina e coloque a placa na incubadora.
Uma hora antes da transfecção. Substitua a mídia dos poços por 0,5 mililitros de mídia NBIL. Após a incubação, gota a gota, adicione lipofectamina 2000 e mistura de DNA aos poços.
Coloque a placa na incubadora por 48 horas.
