Após a transfecção das mPSCs, aspirar o meio da placa de seis poços. Em seguida, adicione 200 microlitros de tripsina em cada poço. Agite e incube por 30 segundos a 37 graus Celsius.
Toque na lateral da placa e adicione 200 microlitros de tampão FACS gelado. Usando uma pipeta P200, misture o conteúdo de cada poço para desalojar as células e fazer soluções de célula única. Transfira 200 microlitros de cada poço para o poço apropriado na placa de 96 poços Centrifugar a placa a 300 G por cinco minutos.
Após a centrifugação, ressuspenda os pellets em 150 microlitros de tampão FACS antes de passar a amostra em um citômetro de fluxo. Comparadas às transfecções reversas, as transecções anteriores apresentaram proporção significativamente menor de células positivas para o marcador. Curiosamente, o forward Transfect não entregou uma quantidade significativamente menor de DNA em média para a população de células.
Nas transecções reversas, o tempo de incubação influenciou significativamente a porcentagem de células positivas do repórter. No entanto, a expressão média do repórter em células positivas não foi afetada pelo tempo de incubação. Tanto para a poli quanto para a co-transfecção, uma transfecção direta diminuiu significativamente o número de células presentes no desfecho escolhido em comparação com as transfecções reversas.
No caso das politransecções reversas, observou-se maior eficiência de transfecção e maior faixa dinâmica de razões de DNA bem representadas.
