Coloração de Halo-Ligante de Células para Estudos de Interação Condensado de Proteínas Usando Imagem de Molécula Única

1 Depois de criar as linhagens celulares2 que expressam a proteína HaloTag de interesse e Halo-H2B, 3 prepare o reagente de coloração do ligante halo 4 separadamente para ambos. 5 Lave as células com dois mililitros de PBS. 6 Adicione o ligante halo contendo o meio 7 e incube-os a 37 graus Celsius 8 com 5% de dióxido de carbono por uma hora.

9 Depois de remover o meio de coloração, 10 enxágue as células quatro vezes com PBS 11 e incuba-as com meio fresco desprovido de ligantes de halo. 12 Após quatro desses ciclos de incubação de enxágue, 13 transfira a lamínula com células 14 para uma câmara compatível com o estágio do microscópio 15 com pinça estéril. 16 Adicione meios sem vermelho de fenol à câmara antes de obter imagens.