Para começar, tome retinas isoladas em um prato de 24 poços cheio de água bidestilada. Em seguida, substitua a água bidestilada por 800 microlitros de solução de tripsina YL e incube a 37 graus Celsius com agitação suave ou nula por 4 horas e 15 minutos. Usando a pipeta de transferência de vidro mergulhada em solução de tripsina YL, transfira a retina para uma placa de Petri de 35 milímetros contendo água bidestilada sem fiapos.
Para remover a camada nuclear externa, vire a semiesfera da retina para baixo e use uma escova de cabelo única reta para pressioná-la suavemente até o fundo do prato. Utilize uma escova de laço para escovar suavemente os fotorreceptores da retina. Em seguida, para remover o vítreo, vire a semiesfera da retina para cima.
Use pinças curvas para agarrar o vítreo sob um microscópio dissecante. Usando outra pinça curva, segure a extremidade do vítreo onde ele conecta o nervo óptico. Puxe as duas pinças uma da outra para remover e descartar o vítreo.
Em seguida, vire a retina para baixo novamente e use o pincel reto para pressioná-lo suavemente até o fundo do prato. Depois, use a escova de alça para escovar a vasculatura da cabeça do nervo óptico em direção à periferia para remover o tecido neural restante. Gire a retina lentamente com a escova reta e use a escova de alça para remover todos os pequenos pedaços de tecido neural até que a rede vascular esteja limpa.
Para montar a vasculatura retiniana, use a escova de alça para virar a semiesfera da retina voltada para cima e empurre suavemente a vasculatura para baixo na lâmina de vidro. Em seguida, use o cabelo para prender a vasculatura aberta no centro da lâmina. Escove o vaso retiniano em forma de tigela do nervo óptico para a periferia para montar a vasculatura plana.
Repita a escovação em todas as direções até que a vasculatura grude completamente na lâmina.
