Coloração imunoistoquímica fluorescente cíclica multiplex de cortes de tecido canceroso

Para começar, obtenha lâminas previamente preparadas contendo cortes de tecido cancerígeno. Preparar mistura de trabalho de anticorpos primários. Adicione o complexo de anticorpos na seção da lâmina e incube por uma hora à temperatura ambiente.

Em seguida, lave a lâmina três vezes com PBS 0,1% de interpolação por cinco minutos. Preparar mistura de anticorpos secundários fluorescentes. Adicione na lâmina e incube à temperatura ambiente por uma hora.

Em seguida, realize uma segunda rodada de incubação de anticorpos primários à temperatura ambiente por uma hora. Lave a lâmina três vezes com PBS de 0,1% de Tween por cinco minutos cada. E usando um papel de filtro, remova o excesso de água do perímetro do tecido.

Da mesma forma, realize uma segunda rodada de incubação de anticorpos secundários e lave, conforme demonstrado anteriormente. Agora, adicione o reagente permanganato de potássio ao tecido. Após um minuto, enxágue com água corrente por cinco minutos.

Realizar a desidratação com concentrações crescentes de álcool. Finalmente, adicione um DAPI para cobrir completamente a seção de tecido e coloque uma lamínula para imagens multiespectrais. A imagem de imunofluorescência multiplex indicou a presença de células positivas para CD três, CD oito positivas, CD 20 positivas em tecido de metástases cerebrais de câncer de pulmão.