1 Comece colocando2 o frasco de cintilação de vidro contendo 3 scBAT do camundongo em PBS na bancada. 4 Substitua o PBS por 10 mililitros de frio, 5 4% de paraformaldeído. 6 Coloque o frasco em um nutador, 7 balançando a quatro graus Celsius durante a noite 8 para fixar o scBAT.
9 No dia seguinte, substitua a solução de paraformaldeído 10 por 10 a 15 mililitros de PBS. 11 Coloque o frasco para injetáveis num nutador 12 e agite durante 30 minutos à temperatura ambiente. 13 Substitua o PBS por solução salina 0,85% 14 e continue balançando por mais 30 minutos.
15 Em seguida, substitua a solução salina por 10 mililitros 16 de etanol a 70%, solução salina a 0,85%. 17 Guarde o frasco para injetáveis num frigorífico de quatro graus durante a noite 18 ou até estar pronto para a inclusão em parafina. 19 No dia seguinte, remova a mistura salina de etanol a 70% 20 do frasco e adicione 10 a 15 mililitros 21 de álcool desidratante a 95%.
22 Balance o frasco em um nutador em temperatura ambiente 23 por uma hora. 24 Após a segunda lavagem, adicione 10 a 15 mililitros 25 de álcool desidratante 100% 26 e continue balançando em um nutator por uma hora. 27 Para limpar o scBAT para incorporação, adicione 10 mililitros de tolueno 28 ao frasco e continue balançando em um nutador 29 até que o scBAT fique transparente.
30 Em seguida, embutir o scBAT em cera de parafina. 31 Corte o scBAT com um micrótomo 32 e prossiga para a coloração de hematoxilina e eosina. 33 A coloração de hematoxilina e eosina confirmou 34 que o scBAT compreende estruturas teciduais características 35 do tecido adiposo marrom, 36 incluindo numerosos pequenos adipócitos multiloculares 37 em camundongos pós-natais e adultos.
