Para começar, adicione 30 microlitros de contas de Concanavalina-A em um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro. Pipete 300 microlitros de tampão de ligação para as contas. Inverta o tubo várias vezes para misturar bem e, em seguida, coloque-o em um rack magnético.
Uma vez clarificada a solução, pipetar o sobrenadante. Pipete 300 microlitros de tampão de ligação para o tubo depois de removê-lo do rack. Inverta novamente para misturar o conteúdo do tubo.
Distribua o conteúdo do tubo uniformemente em três tubos de uma tira de oito tubos de PCR e, em seguida, coloque a tira de tubo no rack magnético até que a solução seja clarificada. Depois de remover o sobrenadante, pipete 10 microlitros de tampão de ligação nos tubos e misture. Coloque as contas preparadas no gelo até novas experimentações.
Em seguida, tripsinize mioblastos de camundongos cultivados nas placas. Após a centrifugação das células, use vácuo para remover o sobrenadante com vácuo. Em seguida, ressuspenda o pellet em PBS.
Centrifugue as células depois de realizar uma contagem de células da suspensão e, em seguida, ressuspenda o pellet em um volume adequado de tampão de lavagem para gerar uma densidade celular de 700.000 células por mililitro. Pipete 100 microlitros desta suspensão celular em cada tubo da tira de tubo PCR e misture bem, depois coloque a tira de tubo em um agitador de movimento de gangorra por 10 minutos em temperatura ambiente para permitir que as contas de Concanavalina-A capturem as células. Esclareça o conteúdo dos tubos mais uma vez em um rack magnético antes de pipetar o sobrenadante.
Finalmente, observe o sobrenadante ao microscópio para avaliar a eficácia da ligação do grânulo de Concanavalina A com as células.
