Avaliação quantitativa da colonização por Bacillus velezensis em raízes de Arabidopsis thaliana

Para começar, pesar dois tubos de mililitros e registrar o peso inicial como w0. Colha os tecidos radiculares de Arabidopsis thaliana co-cultivados e lave-os três vezes em água estéril. Coloque a raiz em papel de filtro para remover o excesso de água.

Transfira as raízes para o tubo de microcentrífuga pré-pesado. Pese as raízes com o tubo e registre-o como w1. Em seguida, adicione 1 mililitro de PBS ao tubo e Vortex por oito minutos na velocidade máxima.

Diluir as suspensões contendo as células bacterianas colonizadas pela raiz de 1 por 10 para o 1º negativo para 1 por 10 elevado ao 5º negativo. Espalhe as suspensões bacterianas diluídas em placas de ágar Luria-Bertani e incube a 37 graus Celsius por 10 horas. Após a incubação, contar as colónias bacterianas em placas de ágar Luria-Bertani.

Calcule as unidades formadoras de colônias de acordo com a diluição correspondente e normalize os dados com o peso fresco da raiz para obter uma contagem de células bacterianas colonizadas por grama de raiz. Dois dias após a inoculação, a colonização de Bacillus velezensis tipo selvagem SQR9 e um mutante derivado, delta 8mcp, demonstrou redução significativa da colonização radicular de delta 8mcp, sugerindo a eficácia desta condição e método na medição da colonização bacteriana.