Para começar, coloque um camundongo anestesiado e intubado em decúbito lateral direito. Leve as duas patas dianteiras para o canto superior esquerdo e as patas traseiras para os cantos inferiores. Desinfete o tórax esquerdo com álcool 70% antes da incisão.
Depois de incisar e abrir a pele sobre o quarto espaço intercostal, use uma caneta cautérica portátil para coagular os vasos sanguíneos visíveis nas camadas subcutânea e muscular. Com a tesoura, divida os músculos grande dorsal e serrátil anterior ao longo do comprimento da incisão na pele. Eleve cuidadosamente a quarta costela com um par de pinças curvas finas.
Faça um corte pontual logo acima da quinta costela para entrar no quarto espaço intercostal. Quando a pressão negativa da cavidade pleural for perdida e o pulmão se retrair da parede torácica, estenda a toracotomia anterior e posteriormente no quarto espaço intercostal. Aplique dois afastadores de costela para abrir o espaço da costela, garantindo que uma janela de trabalho de pelo menos um centímetro quadrado esteja disponível para visualização.
Use dois aplicadores pontiagudos de algodão para elevar o cefálico e mobilizar o pulmão esquerdo. Em seguida, divida sem rodeios o ligamento pulmonar inferior translúcido. Reflita o pulmão anteriormente para visualizar o hilo pulmonar esquerdo posterior.
Em seguida, corte aproximadamente 10 centímetros de uma gravata de seda 6-0 e coloque o ponto médio da gravata posterior ao hilo. Agora vire o pulmão esquerdo posteriormente sobre a gravata e puxe as duas pontas da gravata anteriormente. Segure uma pinça de mosquito curva na mão dominante e um par de pinças na outra mão.
Segure uma extremidade livre A da gravata com a pinça e enrole sua ponta média sobre o grampo fechado uma vez. Em seguida, segure o ponto médio da outra extremidade livre B com o clamp e puxe com as duas mãos para apertar o nó deslizante. Depois de dar o nó, B deve ter um laço do nó, enquanto A deve estar reto.
Para confirmar a oclusão adequada do brônquio, oclua manualmente a tubulação de saída do tubo endotraqueal para o ventilador. Isso não resultará em inflação do pulmão esquerdo. Em seguida, feche a incisão na pele com um ou dois pontos simples interrompidos feitos com uma sutura de náilon 6-0.
Após o período necessário de isquemia, puxe suavemente a extremidade B da gravata para soltar o nó corrediço. Inicie imediatamente o músculo de reperfusão e oclua o tubo de saída do tubo endotraqueal para o ventilador para reinsuflar o pulmão. Durante a reperfusão, feche o espaço da quarta costela com um único ponto de sutura de náilon 6-0.
Coloque o camundongo em decúbito dorsal 15 a 20 minutos antes do final do tempo de reperfusão. Prenda todos os quatro membros com fita adesiva. Depois de realizar uma laparotomia na linha média, estenda a laparotomia para a esquerda e para a direita até a linha axilar seguindo a curva da costela mais inferior.
Do abdômen, faça uma incisão no diafragma anterior para entrar no tórax. Em seguida, estenda a incisão para a esquerda e direita da linha axilar anterior, ao longo da costela mais inferior. Divida as costelas bilaterais ao longo da linha axilar anterior.
Estenda para cima para criar uma toracotomia em concha. Agora reflita a parede torácica anterior para cima para expor o coração e os pulmões bilaterais. Em seguida, aplique uma pinça na parede torácica anterior para facilitar a retração.
Use uma pinça de mosquito curva na linha média para retrair o diafragma para baixo para melhor visualização do tórax. Em seguida, retorne o lóbulo acessório que se estende além da linha média para o tórax esquerdo e de volta para o tórax direito. Com a ajuda de um aplicador com ponta de algodão e tesoura, divida o ligamento fino que liga o lobo ao tórax esquerdo, reflita todo o pulmão anteriormente.
Em seguida, coloque outra gravata de seda 6-0 posterior ao hilo direito. Dê um nó corrediço ao redor do hilo direito, certificando-se de que todos os quatro lobos do pulmão direito estejam circundados. Em seguida, cubra uma agulha de calibre 31 de meia polegada em uma seringa de tuberculina de 1cc com 200 microlitros de heparina.
Após quatro minutos de pinçamento hilar direito, retire o sangue arterial do ventrículo esquerdo para a seringa. Incline a agulha em direção ao pescoço esquerdo. Múltiplas punções podem ser necessárias para obter sangue suficiente para a avaliação da gasometria arterial.
O pinçamento hilar esquerdo resultou em redução significativa da pressão parcial de oxigênio no pulmão esquerdo em relação à toracotomia simulada. A avaliação da gasometria arterial mostrou que a maioria dos neutrófilos era intravascular após o pinçamento hilar do pulmão esquerdo.
