Para começar, obtenha o camundongo sacrificado administrado com os plasmídeos apropriados. Para a preparação da placa de cultura, adicione 1,9 mililitros de meio de cultura a uma placa à base de vidro e coloque cuidadosamente uma pastilha de cultura de células nela. Em seguida, adicione 500 microlitros de meio de cultura ao filtro e coloque-o no gelo.
Remova os embriões e coloque-os em uma placa de Petri contendo PBS gelado. Sob um microscópio, selecione embriões com base na expressão de proteína fluorescente verde ou outros marcadores fluorescentes. Depois de dissecar o cérebro, coloque-o em gel de agarose derretido em um molde criogênico e enrole-o várias vezes.
Assim que a agarose solidificar à temperatura ambiente, coloque-a no gelo. Usando um micrótomo vibratório, corte os cérebros coronalmente com uma espessura de 350 micrômetros e organize-os no filtro. Em seguida, remova 600 microlitros de meio de cultura de dentro e de fora do copo do filtro.
Após cinco minutos, adicione 100 microlitros de meio de cultura fresco no interior do folheto de cultura de células. Para imagens de lapso de tempo, adquira imagens de pilha de cerca de 10Z usando uma lente 20X de longa distância de trabalho. A análise de imagens de lapso de tempo do cérebro de camundongos forneceu as trajetórias das células migratórias positivas para EGFP e das células migratórias positivas para RFP de duas a 21 horas.
