Para começar, use ressonância magnética multi ou biparamétrica para localizar o tumor e sua posição na próstata antes da cirurgia. Em seguida, prepare o paciente com acesso abdominal, insuflação e colocação de porta de quimioterapia. Defina o pneumoperitônio para 12 milímetros.
Faça uma incisão no peritônio para liberar a bexiga e dissecar o espaço perirretal. Agora, abra a fáscia pélvica de ambos os lados e faça uma dissecção completa dos aspectos anterior e lateral da próstata e da bexiga. Abra o colo da bexiga e identifique a uretra proximal.
Corte a uretra proximal para obter acesso aos aspectos posteriores da próstata e da bexiga. Em seguida, disseque as vesículas seminais e o espaço reto, seguidos pelos aspectos laterais da próstata. Disseque o ápice.
Em seguida, corte a uretra distal. Em seguida, complete a anastomose vesico-uretral. Extraia a próstata e suture a incisão.
Coloque a próstata recém-coletada em um recipiente seco. Para processar a próstata para coleta de amostras, primeiro selecione as zonas-alvo com base nas informações de ressonância magnética. Com uma agulha automática descartável, recupere amostras cilíndricas das áreas selecionadas.
Em seguida, identifique a zona externa do cilindro e prenda-o com uma pinça de tecido. Coloque o cilindro em uma lâmina e marque a zona externa com tinta de tecido. Coloque os cilindros coletados horizontalmente em um disco porta-amostras cheio de meio de incorporação de criostato e transfira-os para uma placa de resfriamento de micrótomo para corte.
Em seguida, prenda o disco porta-amostras ao mandril da amostra. Use o composto OCT para incorporar a amostra de tecido antes do corte. Use um micrótomo criostato para cortar a amostra a 25 graus Celsius.
Colete seções finas de tecido em forma de cilindro em lâminas de microscópio tratadas. Fixe as lâminas em etanol a 96% e hidrate-as em água destilada. Manchar as seções em hematoxilina de Harris por um minuto.
Agora trate as lâminas com hidróxido de amônio a 30% para tornar a hematoxilina azul. Em seguida, manche as lâminas lavadas com eosina por 30 segundos. Em seguida, desidrate as lâminas com titulações crescentes de álcool, seguidas de limpeza com 100% de xileno.
Monte as lâminas com GPX e coloque uma lamínula no tecido manchado. Use um microscópio óptico para analisar a amostra corada, discriminando áreas com o carcinoma e determinando o escore de Gleason do tumor. Marque zonas tumorais precisas nas lâminas.
Em seguida, com a lâmina cirúrgica, macromicrodissecar as áreas de amostra marcadas na lâmina dentro do disco OCT. Quando o tecido de incorporação começar a descongelar, levante o tecido com uma pinça e coloque-os em criotubos corretamente rotulados. Essa técnica foi utilizada para obter material tumoral de 61% dos casos estudados.
Das 16 próstatas em que a aquisição do tumor não foi bem-sucedida, 10 tinham menos de 10% de carga tumoral e nenhuma excedeu 20% Uma análise da curva ROC mostrou uma área sob a curva de 0,843, indicando que este método pode fornecer resultados satisfatórios de aquisição do tumor. A correlação histopatológica da peça de prostatectomia radical versus a biópsia do cilindro processada foi realizada usando coloração de hematoxilina e eosina. Diferentes padrões histológicos foram encontrados ao longo do cilindro, como o padrão de Gleason 3, que mostrou pequenas glândulas bem formadas revestidas por células cancerígenas.
Glândulas de formato irregular com células atípicas aumentadas foram observadas nas seções do padrão 4 de Gleason. As amostras com neoplasia intraepitelial prostática mostraram células apinhadas dentro dos espaços ductais.
