Comece colocando os instrumentos cirúrgicos estéreis na bancada de trabalho. Para prender o camundongo anestesiado na estrutura estereotáxica, misture os incisivos superiores com uma pinça nasal e estabilize a cabeça com duas barras auriculares. Usando uma tesoura para os olhos, faça uma incisão de 0,5 centímetro no couro cabeludo para expor o crânio.
Com um cotonete embebido em peróxido de hidrogênio a 3%, esfregue o crânio exposto para remover o periósteo. Deixe o crânio secar. Fixe a broca no instrumento estereotáxico e ajuste os botões do braço estereotáxico.
Com a ajuda de uma lupa, posicione a ponta da broca precisamente no bregma. Registre o valor do eixo Z no bregma usando o display digital LCD. Agora, posicione a ponta de perfuração no lambda e registre o valor do eixo Z.
Ajuste o grampo do nariz para minimizar a diferença entre os dois valores Z. Posicione a broca nas coordenadas menos 5,2 para X e mais 0,8 para Y para medir o valor do eixo Z na direção ventral dorsal. Reposicione a broca nas coordenadas menos 5,2 para X menos 0,8 para Y e meça o valor do eixo Z novamente.
Ajuste as barras auriculares para uma escala especificada. Posicione a broca no bregma e defina três coordenadas no display digital LCD para zero. Usando coordenadas de referência, posicione a broca acima da região de interesse.
Inicie a broca e abaixe-a gradualmente usando o braço vertical até que a broca penetre no crânio. Limpe os detritos e o sangue usando cotonetes. Adicione 25 microlitros de tampão de carregamento SDS-PAGE contendo azul de bromofenol e 50 microlitros de água bidestilada a um tubo de 200 microlitros.
Cubra a janela craniana com uma almofada de algodão umedecida com solução salina. Coloque 0,3 microlitros de corante na microseringa. Conecte a seringa e o microinjetor estereotáxico motorizado ao braço estereotáxico.
Posicione a ponta da seringa no bregma e defina as coordenadas para zero no display digital LCD. De acordo com as coordenadas de referência, ajuste a agulha na região de interesse. Defina a velocidade do injetor para 0,1 microlitro por minuto e inicie o microinjetor motorizado, fornecendo 0,3 microlitro de corante na região alvo.
Após 10 minutos, retire lentamente o injetor.
