Para começar, insira a parte inferior de uma ponta de pipeta de 200 microlitros cortada em um dispositivo de captura microfluídica pré-fabricado. Pipeta, usando uma seringa equipada com um filtro de 0,2 micrômetro, para injetar 400 microlitros de solução de beta-caseína no reservatório de entrada do chip. Centrifugue o chip a 900 g por seis minutos.
O nível do líquido agora deve ser igual na entrada e na saída. Desenhe um contorno do espaçador em dois slides de objetiva. Limpe as lâminas com plasma de alto oxigênio por um minuto para torná-las hidrofílicas.
Adicione agarose de baixa temperatura de gelificação em cima da lâmina até que esteja totalmente coberta com agarose. Em seguida, incline a lâmina em um ângulo de 90 graus e drene o excesso de agarose para um lenço de papel. Coloque as lâminas a 50 graus Celsius por 30 minutos.
Com um sonicador de sonda portátil, equipado com uma sonda de um milímetro, sonicar os proteolipossomas preparados. Mantenha os SUVs proteo no gelo por 30 segundos antes de repetir a sonicação cinco vezes. Com uma seringa de 100 microlitros, deposite gotículas de 0,5 microlitro dos SUVs proteo em um gel de agarose preparado.
Use o fluxo de nitrogênio por cerca de 10 minutos para secar as gotículas. Com uma seringa e uma agulha, pipete a solução de inchaço para uma câmara preparada através de um pequeno orifício na lateral e deixe as vesículas inchar a 22 graus Celsius por pelo menos 30 minutos. Bata a câmara em uma superfície sólida para colher os GUVs do gel.
Para capturar os GUVs para microscopia, monte um chip microfluídico passivado em um microscópio. Depois de verificar se há defeitos, conecte o tubo com uma agulha dobrada à saída do reservatório. Depois de conectar a outra extremidade a uma seringa de um mililitro, monte a seringa em uma bomba com vazão máxima de 10 microlitros por minuto.
Substitua o tampão de lavagem do reservatório por meio novo. Lave com pelo menos 80 microlitros de tampão P.Depois de remover o excesso de tampão, adicione os proteo GUVs ao reservatório. Monitore o chip ao longo do tempo até que GUVs suficientes tenham sido presos no chip.
Pipete o excesso de solução de GUV. Em seguida, adicione o tampão de lavagem P a uma taxa de fluxo de 0,1 a um microlitro por minuto. Finalmente, localize as armadilhas com uma quantidade suficiente de vesículas.
Depois de aplicar as configurações ao microscópio, adicione o tampão R ao reservatório a uma taxa de fluxo de 0,5 microlitros por minuto. A reidratação de LUVs proteo secos em um gel de agarose de baixa temperatura de gelificação resultou na formação de vesículas de tamanho micrométrico. Os GUVs foram colhidos e aprisionados em um dispositivo microfluídico passivado com beta-caseína.
