Depois de anestesiar e remover os pelos do mouse, coloque-o em uma almofada de aquecimento envolta em um tapete cirúrgico de autoclave. Endireite suavemente o corpo e levante a pele ao longo da coluna. Use um marcador cirúrgico para desenhar um único ponto em um lado do mouse no centro da pele da tenda.
Depois de cultivar o BXPC, três linhagens celulares de câncer de pâncreas humano por duas semanas. Retire o balão da incubadora e coloque-o na cabine de segurança biológica. Aspire o meio e lave as células com cinco mililitros de PBS.
Adicione cinco mililitros de agente de dissociação celular no frasco e incube a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono por seis a sete minutos. Transferir a suspensão celular para um tubo de 15 mililitros e centrifugar a 500 g durante cinco minutos. Depois de remover o sobrenadante, ressuspenda as células em meio de crescimento completo.
Usando um hemocitômetro, determine a concentração de células e a contagem total de células. Centrifugar uma suspensão de 1,5 ml contendo 250 000 células por ratinho para serem inoculadas a 500 g durante cinco minutos. Após remover o sobrenadante, ressuspenda o pellet em 10 microlitros de PBS por camundongo a ser inoculado e coloque o tubo no gelo.
Usando pontas de pipeta resfriadas, adicione uma membrana basal solubilizada no tubo. Carregue a agulha de insulina de calibre 29 gelada com 20 microlitros da suspensão celular e coloque a seringa no gelo. Insira a agulha aproximadamente um centímetro no ponto de referência do mouse e mova a agulha sob a pele até que esteja no ponto de referência, com o lado chanfrado da agulha para cima.
Injete 20 microlitros de suspensão celular e aguarde 45 segundos antes de remover a seringa. Depois de remover o camundongo da anestesia, espere até que ele se torne deambulatório antes de retornar à sua gaiola de origem.
