Conjugação de ACE2 e anticorpos de controle em microesferas magnéticas para capturar partículas virais de células infectadas por SARS-CoV-2

Para começar, prepare a solução de trabalho de NeutrAvidina em tampão MES em um tubo de microcentrífuga de baixa ligação a proteínas de 1,5 mililitro. Em seguida, prepare a solução de trabalho do anticorpo de controle de imunoglobulina G caprina em tampão MES. Vortex a solução diluída de anticorpos e centrifugue o tubo.

Em seguida, pegue a placa Microtiter contendo grânulos ativados e coloque-a em um separador de placa magnética por 30 segundos para imobilizar os grânulos. Com a placa de microtitulação ainda posicionada no separador magnético, aspire o sobrenadante dos grânulos imobilizados do ímã. Em seguida, adicione 100 microlitros de solução de NeutrAvidina, solução de anticorpos e tampão MES aos poços apropriados contendo grânulos.

Selar a placa de microtitulação e incubar durante duas horas num agitador orbital a 650 RPM no escuro à temperatura ambiente. Em seguida, lave os grânulos com PBST usando uma lavadora automatizada. Após incubação durante a noite, preparar a solução de trabalho ACE2 biotinilada humana recombinante e biotina em PBS 10 milimolares.

Imobilizar as microesferas no separador de placas magnéticas durante 30 segundos e aspirar o sobrenadante das microesferas imobilizadas por ímanes, como indicado anteriormente. Remova a placa de microtitulação do separador magnético e adicione 50 microlitros de PBS de 10 milimolares a cada poço. Em seguida, adicione 100 microlitros da ACE2 biotinilada e da solução de trabalho de biotina aos poços apropriados contendo microesferas conjugadas com NeutrAvidina.

Sele a placa de microtitulação e incube por uma hora em um agitador orbital, conforme mostrado anteriormente. Após lavar as microesferas, armazene as microesferas conjugadas com ACE2 e biotina.