Preparação de nanopartículas magnéticas funcionalizadas para imagens fluorescentes resolvidas no tempo

Para começar, adicione nanopartículas funcionalizadas de estreptavidina aos tubos para detecção de TNF alfa, interleucina-1 beta e interleucina-6. Diluir a estreptavidina mais nanopartículas em volumes iguais de PBS. Em seguida, adicione as soluções de anticorpos de captura biotinilados aos tubos e incube por 30 minutos em temperatura ambiente.

Em seguida, adicione 0,01% de solução de D-biotina 1 milimolar a cada tubo e incube por cinco minutos. Em seguida, segure um ímã de neodímio próximo ao tubo para coletar as partículas. Rejeitar o sobrenadante transparente e ressuspender imediatamente as nanopartículas numa mistura de Pluronic F-127 e PBS e incubar durante 30 minutos.

Depois de incubar as partículas por 30 minutos em tampão de armazenamento, agite-as para garantir uma mistura uniforme. Imediatamente antes do encapsulamento, combine as nanopartículas conjugadas para interleucina-6, TNF alfa e interleucina-1 beta. Agora, lave as partículas com meio completo usando o ímã conforme demonstrado anteriormente e ressuspenda as esferas em meio completo.

Em seguida, adicione anticorpos de detecção para interleucina-6, TNF alfa e interleucina-1 beta para atingir a concentração final de 10 nanomolares.