Para começar, encha uma seringa de um mililitro com 500 microlitros de fase contínua. Conecte o microtubo de PTFE a uma agulha de calibre 27 de 0.75 polegadas. Monte o conjunto na seringa e, posteriormente, na bomba da seringa.
Em seguida, faça um furo usando um punção de biópsia de 0,75 milímetro no meio de um recorte PDMS. Puxe aproximadamente três centímetros de tubo de PTFE através do orifício no recorte e empurre o conjunto para o topo de uma ponta de pipeta de 200 microlitros. Sele o conector com cola curável por UV na parte superior da pipeta e prenda o outro lado do tubo a uma agulha de calibre 23 de 1,25 polegadas.
Em seguida, encha duas seringas de um mililitro com 500 microlitros de óleo mineral leve. Conecte duas agulhas de calibre 23 com os acessórios feitos sob medida e monte-as na bomba de seringa. Usando o software de controle da bomba de seringa, aspire a nanopartícula funcionalizada e a solução celular na ponta da pipeta das fases aquosas.
Depois de limpar a câmara de observação preparada, prenda a câmara no suporte da câmara impresso equipado com dois ímãs de neodímio a 30 graus. Agora, abra as duas portas e conecte uma toalha de papel na porta superior para absorver o excesso de fase externa durante o enchimento. Conecte a fase contínua à entrada superior do chip microfluídico.
Em seguida, lave o chip com a fase contínua por aproximadamente 30 segundos a uma vazão de 1800 microlitros por hora. Encaixar as pontas da pipeta das soluções aquosas nas duas entradas intermédias da pastilha. Inicie o fluxo da solução aquosa a 200 microlitros por hora para cada solução.
Assim que o líquido aparecer na saída, inicie o fluxo da fase oleosa fluorada a 800 microlitros por hora. Aguarde até que a produção estável de gotículas seja estabelecida, indicada por uma solução homogênea cinza e brilhante na saída. Em seguida, conecte o microtubo de PTFE à porta de saída para coletar as gotículas.
Usando o módulo de ponteira de um encaixe de uma peça apertada com os dedos, direcione-os para uma câmara de observação. Assim que a câmara estiver cheia, pare o fluxo e feche as portas com plugues de porta usando pressão apertada. Após a produção de gotículas, lave o chip com óleo fluorado, seguido de nitrogênio, para soprar qualquer líquido restante.
Monte o suporte da câmara no microscópio com um estágio de formato de placa de poço. Em seguida, usando a objetiva de 10x, mude o microscópio para o canal de campo claro. Concentre-se nas gotículas imobilizadas no campo claro e mova-se para o centro da câmara.
Em seguida, ative o sistema de foco automatizado. Ajuste o plano de medição no canal de campo claro para que as bordas das gotículas apareçam como círculos pretos nítidos facilmente distinguíveis da fase oleosa e do fundo. Passe por cada um dos canais de fluorescência, definindo o plano de medição ideal para eles.
Para medições de realocação, concentre-se no agregado de nanopartículas nos canais FITC, TRITC e Cyanine5.
